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  • Mergene1000® HepG2细胞专用DNA转染试剂
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Mergene1000® HepG2细胞专用DNA转染试剂

货号:164416

规格:100μL/0.5mL/1mL

价格: ¥150/¥680/¥1280

数量: - +
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产品概述

Mergene1000® HepG2细胞专用DNA转染试剂是一款性能优良的DNA转染试剂,可用于质粒DNA的传送。它具有较强的DNA转染能力,专用HepG2细胞,可得到较高转染效率,具有毒性低、稳定性好、操作简单易行、重复性好等优点。

产品信息

名称

Mergene1000® HepG2细胞专用DNA转染试剂

货号

164416

颜色

无色透明

规格

100μL/0.5mL/1mL

包装

1

保存条件

2-8℃

有效期

18个月

运输条件

常温

产品简易操作流程图

image.png

产品使用步骤

24孔板为例,Mergene1000® HepG2细胞专用DNA转染试剂(μL)与质粒DNAμg)按照2:1比例混合,可根据情况在1:15:1的比例之间调整。其它规格培养板或培养皿可参考表1的转染推荐量。

细胞铺板

转染前一天,每孔加入500 μL MEM(含NEAA)+10% FBS1% P/S完全培养基,接种1.1×105个细胞/孔,细胞培养24 h,可根据细胞实际状态适当调整培养时间,使转染时细胞密度达到60%-70%的融合度

转染复合物制备

1. 准备2个无菌离心管,取一管加入0.4 μg质粒和MEM(含NEAA)基础培养基,终体积为10 μL,轻轻吹打混匀;另一管加入0.8 μL Mergene1000® HepG2细胞专用DNA转染试剂和9.2 μL MEM(含NEAA基础培养基,终体积为10 μL,吹打混匀后室温孵育5 min(以上是针对每孔细胞的制备量,请根据您的具体实验条件和需求,计算实验所需的制备量)

2. 将上述两管等体积稀释液混合,轻轻吹打混匀,室温静置20 min

细胞转染

1. 将制备的20 μL复合物逐滴加到细胞中,采用8字法混匀细胞培养板,放置375% CO2培养箱培养

2. 培养18-48 h后检测基因表达。

              表1   HepG2细胞不同培养容器转染参考用量

培养器皿

单孔面积

细胞接种量

接种培养基

基础培养基

稀释后终体积

质粒转染

试剂用量

DNA

96孔板

0.3 cm2

1.0-4.0×104/

200 μL

2×5 μL

0.4 μL

0.2 μg

24孔板

2.0 cm2

0.8-1.2×105/

500 μL

2×10 μL

0.8 μL

0.4 μg

12孔板

4.0 cm2

1.6-2.4×105/

1 mL

2×20 μL

2.0 μL

1.0 μg

6孔板

10.0 cm2

4.0-6.0×105/

2 mL

2×50 μL

4.0 μL

2.0 μg

6 cm

20.0 cm2

0.8-1.2×106/

5 mL

2×0.1 mL

8.0 μL

4.0 μg

10 cm

60.0 cm2

2.4-3.6×106/

15 mL

2×0.3 mL

24.0 μL

12.0 μg

【注】该表使用量仅供参考,DNAMergene1000® HepG2细胞专用DNA转染试剂具体使用量还需根据细胞状况及其他实验条件进行优化。

四、注意事项

1. 以上步骤中的细胞接种量、转染比例是实验室基于HepG2细胞摸索的结果,仅供参考。具体实验用量可根据实际情况进行调整。

2. 该产品常温运输,使用时可分装保存,避免多次长时间开盖

3. 需自备MEM(含NEAA)基础培养基,用以稀释质粒DNA和转染试剂。

4. 转染操作时,应确保细胞融合度不低于60%,一般维持在60%70%左右为宜。具体铺板密度可根据细胞的实际情况进行调整。

5. 转染后不需要除去转染复合物或更换新鲜培养基。实际操作可根据细胞状态,转染后培养4-6 h选择更换培养基。

6. 使用高纯度的无内毒素DNA有助于获得较高的转染效率。

7. 初次使用应优化质粒浓度和试剂量以得到最高的转染效率。

8. 本产品仅限于专业人员的科研用途。

9. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套无菌操作。

实验结果展示(仅供参考)

image.png 

1. Mergene1000® HepG2细胞专用DNA转染试剂用EGFP表达质粒转染HepG2细胞后的实拍明场和荧光照片。

image.png 

2. Mergene1000® HepG2细胞专用DNA转染试剂用EGFP表达质粒转染HepG2细胞的转染效率。


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