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细胞学堂 | 走近碱性成纤维细胞生长因子——bFGF

来源:Pricella  浏览量:  发布时间:2024-05-23 13:47:24


早在1940年,Hoftman等人在脑和垂体的抽提物中发现一种具有促进成纤维细胞生长作用的物质。1974年,这种物质经过成功分离纯化后被命名为成纤维细胞生长因子(fibroblast growth factor,FGF)。随后,科研人员又分离出了一种与FGF高度同源的物质,由于它富含酸性氨基酸碱基,且等电点为酸性(pH=5.6),因此被命名为酸性成纤维细胞生长因子(aFGF)。而先发现的FGF因为对酸和热较为敏感,且等电点呈碱性(pH=9.6),所以被称为碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)。


本期,我们将通过本篇文章深入探讨FGF家族中的重要成员——bFGF,旨在帮您轻松理解并顺利开展相关实验。







bFGF的结构


bFGF是一种含有155个氨基酸的阳离子多肽,具有促进细胞有丝分裂的作用。其氨基酸序列中有55%与aFGF相同,分子量在16~18.5 KD之间。在bFGF分子结构中,存在4个半胱氨基酸,它们在形成分子的三维空间结构中发挥着关键作用。值得注意的是,由丝氨酸取代半胱氨酸的重组bFGF的生物学活性不变。此外,单链多肽的结构使得它更易在大肠杆菌中表达。

bFGF的空间结构

bFGF的空间结构


bFGF有很强的肝素亲和力,特别是在其114~123位氨基酸处,显示出高亲和力,其它部位则有低亲和力。抗bFGF与受体结合的单克隆抗体并不会影响它与肝素的结合能力。然而,如果去除bFGF分子中有羟基端的第42位氨基酸,其肝素亲和力将消失,并可能导致部分生物学活性的丧失。

bFGF与肝素的相互作用

bFGF与肝素的相互作用





bFGF的作用机理


bFGF通过与靶细胞上的受体结合来发挥其生物学功能,因此,在细胞内合成的bFGF需要被分泌到细胞外才能发挥其作用。然而,bFGF的mRNA翻译产物缺少指导其向细胞外分泌的信号序列,这表明其分泌途径与经典途径不同。除了可能是细胞受损或死亡后释放外,bFGF还可能通过自分泌和旁分泌的方式起作用。

bFGF与受体结合后,可能通过以下途径将信号传至细胞核:


bFGF可能激活腺苷酸环化酶与鸟苷酸环化酶,使磷脂酶C(PLC-rl)发生磷酸化。这一过程会导致磷脂酰肌醇-4,5二磷酸(PIP2)分解为甘油二酯(DG)和三磷酸肌醇(IP3),进而激活蛋白激酶C并引发Ca2+内流;

bFGF与受体结合后,可能定位于细胞核,影响RNA聚合酶Ⅰ的功能,从而增强核蛋白体基因的转录。这有助于细胞加速从G0期到G1期及G1期到S期的转换,刺激细胞的DNA合成增强,促进细胞的分裂与增殖;

bFGF还可能通过与受体FGFR结合形成复合物,进而通过内化过程来传导信号

bFGF的信号传导示意图

bFGF的信号传导示意图



   

在细胞培养中的应用


1

bFGF在原代内皮细胞培养中的应用

在原代内皮细胞培养中,bFGF发挥着重要的生物学作用。一般将bEGF和肝素配合使用,能够显著促进内皮细胞的增殖,还能促进内皮细胞的迁移,对内皮细胞的增殖以及形态的维持具有重要作用

2

bFGF在干细胞培养中的应用

bFGF是干细胞培养中的一种关键生长因子,它不仅是重要的促有丝分裂因子,还是形态发生和分化的诱导因子

bFGF对细胞增殖以及维持细胞的未分化状态非常重要。在鼠源干细胞培养过程中,添加白血病抑制因子(Leukemia inhibitory factor, LIF) 通常能有效抑制干细胞的分化。然而,在人源干细胞培养过程中,需要使用bFGF来抑制细胞的分化。在使用饲养层细胞培养时,饲养层细胞分泌的bFGF也发挥着类似作用。

3

bFGF对神经细胞的作用

bFGF是一个重要的促有丝分裂因子,能够刺激神经干细胞的增殖。以幼鼠为例,在皮下注射bFGF的实验中,可以观察到海马体和小脑的颗粒层等神经生发区域的神经干细胞增殖明显增加。此外,bFGF还能与胰岛素样生长因子(IGF)和血小板衍生的生长因子(PDGF)等协同作用,共同调节神经干细胞的增殖。

然而,bFGF不仅能够促进神经干细胞的增殖,还能影响神经干细胞的分化过程。在促进增殖的过程中,bFGF会抑制神经干细胞的分化。当减少bFGF的加入量时,神经干细胞便能够分化为神经元、胶质细胞和少突胶质细胞,这表明bFGF在神经干细胞分化过程中起重要调节作用。

此外,bFGF在神经细胞培养中可能还具有促进神经再生和修复的功能。基于bFGF能够全面启动皮肤各层的更新功能并促进成纤维细胞生长,因此,推测在神经细胞培养中,bFGF可能发挥类似的作用,有助于神经细胞的再生和修复。



参考文献

[1] 

林丽.bFGF对人脐带间充质干细胞胶原表达及对5-Aza诱导向成肌分化的调节作用研究[D].暨南大学,2013.

[2] 

Song X ,Fan Z ,Tian Z , et al.Phase separation on cell surface facilitates bFGF signal transduction with heparan sulphate[J]. Nature Communications, 2022, 13(1):1112-1112.


以上就是关于碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)的概念、作用机理及其应用的解读,更多细胞培养干货,请持续关注细胞学堂专栏~


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