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细胞学堂 | 外泌体分离不再难！普诺赛®四大试剂盒全面解析
来源：Pricella 浏览量： 发布时间：2025-03-28 11:00:00
外泌体作为细胞间通讯的重要介质，其高纯度、高回收率的分离对下游功能分析、组学检测及疾病诊断至关重要。然而，传统外泌体提取方法往往面临设备要求高、操作流程复杂等挑战。为此，普诺赛®针对性开发了多种分离方案，以满足不同样品类型与研究需求。
在上期细胞学堂中，我们梳理了常用的外泌体分离方法，本期我们将进一步聚焦普诺赛®推出的四款外泌体分离试剂盒，详细解析其核心原理、操作流程、注意事项及优势，助力您挑选最适合的产品。
微量外泌体分离试剂盒（磁珠法）
货号：
试剂盒组分：
Exosome Beads、
Solution A、
Elution Buffer
（点击产品图查看详情）
原理概述
利用自主研发的均相液体磁珠（Exosome Beads），通过磁珠特异性结合外泌体而不吸附杂质，以及磁性分离技术，达到高纯度和高回收率的分离效果。
操作流程
1
样品预处理：差速离心（300 g，5 min→2000 g，10 min→14000 g，30 min）逐步去除样品中细胞、细胞碎片及大体积颗粒；
2
富集外泌体：向去除了保护液的磁珠中加入预处理后的样品，置于摇床室温旋转孵育30 min；
3
洗涤：置于磁力架上，静置30s，弃上清，并用Solution A洗涤，重复2次，保留磁珠；
4
分离外泌体：加入Elution Buffer后置于摇床室温旋转孵育30 min；置于磁力架上，静置30s，转移上清到新的离心管中，该上清即为分离的外泌体。
注意事项
在某些样品中，磁珠结合外泌体时可能会结团，但不影响分离效果，无需处理；
完成分离后的外泌体不宜长时间在Elution Buffer中保存。若长时间保存，可使用超滤管将溶液置换为PBS。
优势
分离的外泌体纯度高且完整性好，适合分离微量或珍贵样品中外泌体；分离操作简便，仅需常规磁力架，无需特殊设备，高通量，能同时处理多个样本，兼容自动化操作。
通用外泌体分离试剂盒（SEC法）
货号：
试剂盒组分：
Exosome Purification Column、
Column Adapter
（点击产品图查看详情）
注：P-CA-502和P-CA-503仅产品规格和样品上样量有区别，其他操作是一致的。
原理概述
基于分子排阻色谱原理，利用外泌体纯化柱（Exosome Purification Column）中的多孔凝胶颗粒作为填料，这些填料颗粒根据颗粒大小形成不同的孔道，使得在PBS缓冲液流动的过程中，将样品中外泌体与其他不同尺寸的颗粒进行分离。
操作流程
1
样品预处理：差速离心（300 g，5 min→2000 g，10 min→14000 g，30 min）逐步去除样品中细胞、细胞碎片及大体积颗粒；
2
纯化柱预处理：将纯化柱在室温平衡30 min，检查并排除空气，PBS平衡纯化柱；
3
外泌体分离：待样品完全进入纯化柱，分批加入0.5 mL PBS，并收集流穿液，其中4-8号管（P-CA-502）或8-12号管（P-CA-503）中收集的流穿液即为分离的外泌体；
4
纯化柱维护：先后加入PBS和20%乙醇清洗纯化柱，再将纯化柱加满20%乙醇密封，于4℃保存。
注意事项
本操作中使用的PBS和20%乙醇建议现配现用，同时经0.2 μm滤膜过滤、超声或真空脱气，避免造成纯化柱出现大量气泡，影响分离效果；
纯化柱使用前需充分平衡至室温（18-25℃），温度过低或过高，都会影响外泌体分离效果；
纯化柱中间不能有气泡，使用前后需认真检查，避免影响外泌体分离效果；
纯化柱可以反复利用，但多次使用会影响纯化效果，建议重复使用不超过5次；
当分离的外泌体进行NGS或者其他组学分析时，为避免交叉污染，建议每个样品使用一支新的纯化柱。
优势
分离的外泌体纯度高、回收率高；操作简单，无需专业的纯化设备，可获得无蛋白污染、用于鉴定检测和功能研究的高质量外泌体。
离心柱式外泌体分离试剂盒
货号：
试剂盒组分：
Spin Column 01、
Collection Tubes (2 mL)、
Solution A
（点击产品图查看详情）
原理概述
离心柱中装填的介质能无差别吸附杂质而不结合外泌体，利用离心力实现样品中外泌体与杂质的分离。此法不仅可快速分离外泌体，还可去除游离的外泌体标记染料。
操作流程
1
样品预处理：差速离心（300 g，5 min→2000 g，10 min→14000 g，30 min）逐步去除样品中细胞、细胞碎片及大体积颗粒；
2
离心柱预处理：弃去离心柱（Spin Column 01）上层的保护液体，加入Solution A离心洗涤；
3
外泌体分离：将预处理后的样品加入离心柱中，离心获得的洗脱液即为分离的外泌体。
注意事项
单个离心柱最大上样体积为500 μL，若样品体积超过500 μL，则建议试用50 kDa超滤管浓缩样品至0.5 mL，注意浓缩体积不超过20倍；
对高粘度样品，如血浆、血清、胸腹水等样本，可用等体积去离子水稀释再加入到离心柱中；
对杂质较多的样品，如血浆、血清、胸腹水、牛奶等样本，建议用PBS稀释10倍后，经过50 kDa超滤管浓缩10倍；然后加入剩余液体10倍体积的PBS，超滤浓缩10倍后，再用离心柱分离外泌体；
离心法分离时，控制离心力在300-500×g；若样品粘度大，可适当增加离心力，以确保分离效果。
优势
外泌体分离操作简便、高纯度和高富集量，无需磁力架、超速离心机等特殊设备；能去除游离的外泌体标记染料。
外泌体分离试剂盒（沉淀法）
货号：
试剂盒组分：
Exosome Precipitation Solution、
Solution A
（点击产品图查看详情）
原理概述
通过添加特定的试剂（如Exosome Precipitation Solution），使样品中的外泌体迅速聚集沉降，再通过离心收集沉淀中的外泌体。
操作流程
1
样品预处理：差速离心（300 g，5 min→2000 g，10 min→14000 g，30 min）逐步去除样品中细胞、细胞碎片及大体积颗粒；
2
沉淀外泌体：血清/血浆样品按照样品:Solution A:Exosome Precipitation Solution=2:2:1的体积比混匀；细胞培养上清/尿液样品按照样品:Exosome Precipitation Solution=4:1的体积比混匀；室温孵育30 min或4℃孵育过夜；
3
外泌体回收：高速离心，吸弃上清，向沉淀中加入Solution A重悬沉淀，再次离心收集上清，即为分离的外泌体。
注意事项
注意样品与各试剂的体积比，严格按照推荐比例操作；
细胞培养上清或尿液样品体积过大，可以先进行浓缩再进行沉淀；
操作要轻柔，吸弃上清时避免吸到沉淀影响外泌体得率；
实验时间允许情况下，为保证外泌体分离的高回收率，推荐4℃孵育过夜。
优势
适用样品广，外泌体回收率高、重复性好；无需特殊设备，操作简便快速，能同时处理多个样本。
希望这篇关于外泌体分离试剂盒的选用指南能帮助到您！更多细胞培养相关干货，请持续关注细胞学堂专栏~
