冻存细胞收货处理

本视频为普诺赛冻存细胞收货处理指南，对每一步操作都做了演示，以便实验者在收到细胞后，能正确地处理和复苏。

冻存细胞复苏实验准备：

将15mL离心管、T25细胞培养瓶、移液管、电动移液器等物品提前放入生物安全柜中，紫外照射30min消毒灭菌，细胞完全培养基提前30min放至37℃预热备用。

冻存细胞收货处理步骤

1. 收到细胞后，检查外包装是否完整；

2. 打开外包装，取出保存于干冰中的细胞；

3. 检查冻存管是否有破损，内容物是否融化；

4. 将取出的冻存管迅速放入37℃水浴锅中融化；

5. 冻存管用75%酒精消毒，放入生物安全柜中；

6. 将5ml完全培养基加入15ml离心管中备用；

7. 将冻存管中的细胞悬液加入到准备好的培养基中，轻轻混匀；

8. 将15mL离心管放入离心机中离心，1000rpm/min（约200g）离心3-5min；

9. 将5ml完全培养基加入到T25培养瓶中备用；

10. 取出离心好的细胞，酒精消毒后放入安全柜中；

11. 轻轻吸去离心好的细胞上清；

12. 加入1ml完全培养基重悬细胞；

13. 将重悬好的细胞加入到准备的T25培养瓶中，轻轻混匀；

14. 在显微镜下观察接种的细胞状态及密度；

15. 将培养瓶放入37℃培养箱中培养。

注意事项：

1）操作冻存细胞时应使用手套、工作服和防护面具等，以避免事故的发生；

2）复苏细胞时，应保持管盖拧紧，将管盖以下部分浸入37℃水浴中解冻，解冻过程要快；

3）部分比较脆弱的细胞可不用离心，直接用培养基稀释细胞悬液后进行培养，但要及时通过换液等方式除去含DMSO的细胞冻存液；

4）请参照细胞说明书推荐的培养基和操作方法来培养细胞。