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细胞学堂 | MKN-7细胞培养攻略
来源：Pricella 浏览量： 发布时间：2022-05-17 13:23:56
# MKN-7细胞基础信息 #
01
细胞培养条件
RPMI-1640 (PM150110)＋10% FBS (164210-500)＋1% P/S (PB180120)
02
生长特性
上皮样，贴壁细胞
03
传代方式
用含EDTA的0.25%胰蛋白酶消化7~10min，推荐传代比例1: 2
# 冻存和复苏 #
冻存
建议冻存密度比普通细胞略高。如期望复苏后可以铺满6cm的培养皿，则需冻存的细胞量为培养皿铺满时的1.5倍。
请使用优质冻存液。如果是自己配置的程序冻存液，可以适当提高血清含量。推荐冻存密度1~5×10^6 cell/mL。
复苏
建议使用T25瓶或者6cm的培养皿进行培养。如果复苏前期细胞形态多样，可进行暂时换液处理，待细胞铺满再传代；如需扩增，需等细胞较密集时再传代。
# MKN-7培养注意事项 #
1
MKN-7生长速度很慢
❖ 倍增时间约3天左右，正常培养5~7天可传代一次；
2
贴壁形态展开较大
❖ 消化之后一瓶细胞量比较少，传代时的比例建议1：2，冻存时1瓶细胞只能冻一管；
3
折光度较低
❖ 在显微镜下观察时，轮廓有时不清晰，观察时显微镜亮度请勿太高，否则可能看不到细胞边界；
4
较难消化
❖ 常规的消化方法难以把控，加入培养基后细胞会迅速贴壁。建议使用浸泡消化，使用胰酶完全浸润细胞，直接放入37℃ 的环境中进行消化，消化时间一般在7~10分钟。
❖ 待部分细胞脱壁漂起后，镜下观察，大部分细胞有脱壁迹象后加入适量胰酶，轻轻吹打，将细胞吹落、吹散，随后吸出器皿，加入培养基终止消化，离心收集。
❖ 若还有少量细胞无法轻轻吹下，则在吸出脱落细胞后，加入胰酶继续消化再收集。
图：MKN-7生长图片
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