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细胞学堂 | 不贴壁、容易漂？TM3、TM4细胞培养诀窍盘点
来源：Pricella 浏览量： 发布时间：2022-06-14 11:01:08
TM3、TM4来源于小鼠睾丸组织，其培养条件基本相同，细胞特性却有所不同。
TM3 (小鼠睾丸间质细胞) 在LH作用下cAMP产量升高，但对促卵泡激素没有响应；在LH存在下，TM3细胞可以代谢胆固醇。TM3细胞对LH的响应持续时间与血清批次有关。
TM4 (正常小鼠睾丸Sertoli细胞) 在FSH的作用下cAMP产量增加，但对LH无反应；TM4细胞与原代Sertoli细胞相比，对FSH的反应性降低。TM4细胞组成性纤溶酶原激活物的产量很低，但可被FSH刺激产生，受维甲酸刺激可有大幅增高。TM4细胞可产生视黄醇结合蛋白、组织纤溶酶原激活物和转铁蛋白；TM4细胞表达FSH受体、雄激素受体和孕激素受体；鼠痘病毒阴性。
基础信息
生长特性：贴壁细胞
细胞形态：上皮细胞样
生长培养基：DMEM/F12＋5% HS(164215)＋2.5% FBS＋1% P/S
推荐传代比例：1:3-1:4
推荐换液频率：2~3次/周
冻存条件：55% 基础培养基+40%FBS+5%DMSO
培养条件：
气相：空气，95%；CO2，5%
温度：37℃
图1. TM3正常生长图片
图2. TM4正常生长图片
TM3、TM4细胞贴壁松散，再加上运输刺激，到货时，可能会出现细胞脱壁漂浮的现象。遇到这种情况应该怎么办呢？
如果TM3、TM4到货时发现有大块脱落的细胞团，不要着急，按照以下步骤进行处理后，细胞即可正常生长：
将培养瓶内所有培养基转入无菌离心管，离心收集细胞（1200rpm 3min）；
去掉上清，用PBS重悬细胞，将细胞收集到一个离心管中，PBS震动离心管混匀即可，再次离心（1200rpm 3min）；
去掉上清，加入1mL左右0.25%胰酶重悬混匀细胞，震动离心管混匀即可，不能吹打，放入培养箱消化细胞；
消化2-3min后，用移液枪轻轻吹打细胞悬液，使细胞团分散。加入5mL含血清的培养基混匀后终止消化，离心（1200rpm 3min）；
去掉上清，加入5mL左右的专用完全培养基混匀，接种于无菌容器中。
将细胞按照以上步骤处理后，第二天基本上都会重新贴壁。
完美解决细胞收货问题，只是养好TM3、TM4细胞的其中一个环节。在培养细胞过程中，还有许多细节，是需要重视的。
● 培养过程中，动作一定要轻柔;
●消化1~2min后，在显微镜下看到细胞块中间的细胞明显分离变圆，即可终止，全程不要拍打培养瓶；
●TM3、TM4细胞生长快速，贴壁松散，细胞长满后会成片飘起，注意及时传代；
● 传代第二天可能会有聚团现象，第三天可自行展开；
● 传代密度不可过高，至少预留2天的生长时间；
● 换液时需预热培养基。
