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细胞学堂 | 如何提高THP-1转染效率？
来源：Pricella 浏览量： 发布时间：2022-11-22 09:59:20
THP-1细胞因其特性，本身就很难转染，所以转染效率普遍偏低。但转染效率太低容易影响后续实验的进行，那么我们可以如何提高转染效率呢？
目前实验中THP-1转染使用较多的方法是：脂质体转染、腺病毒转染、慢病毒转染，其中病毒转染效率相较脂质体转染要高一些，但操作更繁琐、成本也更高。
脂质体转染成本低廉，但细胞毒性较大，细胞死亡率较高；
腺病毒转染可在对细胞损伤较小的情况下达较高水平，但可能对细胞免疫状态影响大；
慢病毒转染细胞毒性低，但其病毒产量低，实验消耗病毒量大。
三种方法各有优劣，可根据实验需求选择合适的转染方法。
在开始转染前，很多老师会困惑，THP-1究竟先诱导为巨噬细胞再转染还是先转染再诱导呢？
其实，这两种方法都是可以的，主要根据实验目的来选择。不过THP-1诱导为巨噬细胞后，不能继续传代增殖，所以如果需要大量细胞时，最好提前大量接种，然后再进行转染。
但需要注意的是，无论采用哪种转染方法都会引起部分细胞死亡，因此培养时需要时刻注意THP-1细胞状态，诱导或转染时，最好使用处于对数生长期的细胞。
不论选择哪种方法，在进行转染实验时，我们都需要根据实际情况优化实验条件。影响转染效率的因素很多，从细胞培养条件和细胞生长状态，到转染方法的操作细节，都需要考虑。以下注意事项可为大家在实验遇到难题时，快速进行问题排查：
1
转染效率受转染质粒本身效果影响。瞬时转染宜使用超螺旋DNA；在稳定转染中，细胞对线性DNA的摄取水平低于超螺旋DNA，但它将DNA整合至宿主基因组中的效果更好；
2
一般培养基中加入血清会促进DNA的转染。但脂质体转染和转染RNA时，最好在无血清的情况下进行；
3
在转染之前更换培养基，可提高转染效率，所用培养基可37℃预温；
4
脂质体/ DNA混合物应当逐滴加入，尽可能保持一致，从培养皿一边到另一边，边加入边轻摇培养皿，以确保均匀分布和避免局部高浓度，严格控制时间；
5
抗生素也会影响转染效率，特别是使用脂质体试剂时，会引起细胞毒性从而使转染效率降低。若接种时未添加抗生素，则转染前可不用更换培养基；
6
对于不同的细胞培养板，脂质体核酸转染试剂、DNA、细胞和培养基的使用量会有所不同。
参考文献
