细胞学堂 | 贴壁细胞和悬浮细胞的冻存操作步骤及注意事项

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◈直接将细胞悬液于1200rpm（约250g）3分钟离心后尽量吸干净上清，收集细胞沉淀；

◈ 去上清，用配置好的冻存液重悬细胞，一个T25培养瓶长到传代密度时的细胞量可冻存1支，或者细胞计数后，按照3~5×10⁶cells/支冻存，冻存液用量推荐0.5~1mL/支；

◈ 分装完毕后，拧紧冻存管盖并做好标记；

◈ 将分装好的冻存管转入程序降温盒，放入-80℃冰箱过夜；

◈ 再转移至液氮长期保存。

应选择汇合度80%-90%左右，处于对数生长期时的细胞进行冻存操作，确保细胞冻存时状态最佳，冻存密度可根据细胞特性进行调整；

程序冻存盒、细胞冻存液、完全培养基等试剂都要复温至室温备用；

冻存前注意切勿消化时间过长、吹打力度过重、离心转速过大或离心时间过长，以免造成细胞损伤；

冻存细胞长期保存应放置于液氮，不建议在-80℃长期保存；

若没有程序降温盒，则按下列顺序依次降温：室温→4℃ 20min→-20℃ 30min→-80℃过夜→液氮保存，注意转移过程中要保冷，避免产生温差或冻存管融化。