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细胞学堂 | 骨髓来源树突状细胞（DC细胞）怎么养
来源：Pricella 浏览量： 发布时间：2022-02-22 11:02:49
树突状细胞(dendriticcells, DC)，因其表面具有伪足样或树枝状突起而得名,它是体内最广泛的专职抗原递呈细胞( antigen presenting cells,APC) , 具有强大的激活初始T细胞, 激发初次免疫应答的独特功效。
DC细胞在体内含量甚微, 这极大地限制了DC的研究和应用。但DC能从不同组织里的DC前体细胞分化、诱导而来, 如骨髓、外周血、脐血中培养出来。
DC不仅能诱导免疫反应, 还具有诱导免疫耐受的特性。根据发育成熟状态，将DC分为未成熟DC (immatureDC, im-DC)、成熟DC (matureDC, mDC)和半成熟DC(semi-matureDC, smDC) 。DC表达特异性表面标志OX62, 高表达MHCII、CD80、CD86。成熟的DC具有明显刺激同种异体T细胞增殖的能力。
本文所述内容，适用于小鼠骨髓来源树突状细胞(DC细胞)和大鼠骨髓来源树突状细胞(DC细胞)。
提取方法
取大腿，冲洗骨髓，得到骨髓细胞悬液, 经密度梯度离心得到骨髓单个核细胞。
诱导方法
应用重组粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、重组白细胞介素-4 (IL-4)诱导，可以得到未成熟的DC细胞， 再加入重组肿瘤坏死因子-α(TNF-α) 进行体外诱导培养，可以得到成熟的DC细胞。
标准形态
成熟的DC细胞形态多样。细胞表面伸出树枝样突起, 形态不规则,长短及粗细不一, 细胞形态有的呈叶状, 有的呈星状, 细胞大而透亮。
小鼠骨髓来源树突状细胞(DC细胞)（100X）
小鼠骨髓来源树突状细胞(DC细胞)（200X）
培养注意事项
DC的培养时间较长, DC逐渐由贴壁生长变成半悬浮, 悬浮状态生长。当DC开始半悬浮及悬浮生长后, 换液时吸走的培养液中会带走一定量的DC, 可将其离心后，再置于培养液中继续培养, 避免DC的损失浪费。
DC细胞为不增殖细胞群，建议收货一周内做实验为最佳。
收货处理方法
收到细胞后，请按照以下方法进行操作：
01
取出T25细胞培养瓶，用75%酒精消毒瓶身；
02
拆下封口膜，放入37℃、5%CO2、饱和湿度的细胞培养箱中静置3-4h，以稳定细胞状态。
03
将T25细胞培养瓶中的培养基吸出转移至50ml离心管中，经1200-1500rpm离心3min，弃上清，收集细胞沉淀；
04
用新鲜培养基轻轻吹打混匀细胞沉淀，转入原瓶中继续培养，procell寄送的培养瓶使用的是不透气瓶盖，需要拧松瓶盖让细胞透气。
05
DC细胞为不增殖细胞群，如果您的实验还未准备好，建议您每3天换液一次即可，换液时注意将旧培养基离心收集细胞后放回原瓶继续培养。
06
普诺赛建议您收货后一周内做实验，避免细胞培养时间过长影响状态以及后续试验结果。
半贴壁半悬浮细胞消化处理方法
如您的细胞在做实验前需要消化后转移到孔板或者其他器皿，可按照如下操作进行：
01
吸出旧培养基转移至离心管中，用PBS冲洗2遍，将冲洗的PBS也转入离心管中一起离心，经1200-1500rpm离心3min，弃上清，收集细胞沉淀①；
02
添加0.25%胰蛋白酶消化液1mL至T25培养瓶中，轻微转动培养瓶至消化液覆盖整个培养瓶底后，吸出多余胰蛋白酶消化液，37℃温浴1-3min；倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后，再加入5ml完全培养基终止消化；
03
用吸管轻轻吹打混匀，收集细胞悬液至离心管中；经1200-1500rpm离心3min，弃上清，收集细胞沉淀②；
04
吸取5ml新鲜完全培养基，重悬细胞沉淀①、细胞沉淀②，把①、②混匀；
05
用吸管轻轻吹打混匀、分散细胞，按实验需求接种于实验器皿内（按实验需求），然后补充适量新鲜的完全培养基，置于37℃、5%CO2、饱和湿度的细胞培养箱中静置培养；
06
待细胞状态稳定后，用于实验；可以每2-3天换液一次新鲜的完全培养基。
07
普诺赛建议您收货后一周内做实验，避免细胞培养时间过长影响状态以及后续试验结果。
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